化學發(fā)光免疫測定（chemiluminesent immunoassay，CLIA）是免疫測定技術繼酶免技術（EIA）、放免技術（RIA）、熒光免疫技術（FIA）和時間分辨熒光免疫技術（TRFIA）之后發(fā)展的一項新興測定技術。其
基本原理是將化學發(fā)光系統(tǒng)與免疫反應相結(jié)合，以檢測樣本中的抗原或抗體，由于它既具有免疫反應的高度特異性，又具有發(fā)光反應的高敏感性，且對環(huán)境公害小，因此近年來已被國內(nèi)外臨床實驗室及科研單位，廣泛應用于各種激素、特種蛋白及藥物的監(jiān)測和分析。
化學發(fā)光分析技術根據(jù)其標記物的不同可大致分為3大類：化學發(fā)光酶免疫測定、化學發(fā)光標記免疫測定、電化學發(fā)光免疫測定。
化學發(fā)光酶免疫測定（chemiluminescent enzyme immunoassay，CLEIA）從標記物性質(zhì)來看應屬酶免疫測定。CLEIA測定中的兩次抗原抗體反應步驟均與酶免疫測定相同，僅zui后一步酶反應所用的底物為發(fā)光劑而非顯色劑。CLEIA中常用的兩種標記酶是HRP和ALP，其原理如下。
（一）HRP標記的CLEIA
HRP標記的CLEIA常用的底物為魯米諾或其衍生物。魯米諾的氧化反應在堿性緩沖液中進行，通常以pH8．6的0．1mol／LTrig緩沖液作底物液，當HRP與魯米諾在堿性環(huán)境下發(fā)生氧化反應時，魯米諾將能量轉(zhuǎn)移并zui終以發(fā)射光子的形式釋放，而光的強度與被測物的濃度成正比；此外，HRP催化魯米諾氧化的反應可被某些酚試劑（如鄰碘酚）或螢火蟲熒光素酶等加強。加強劑的作用是增強發(fā)光和延長發(fā)光時間，由此可提高檢測的敏感度。
（二）ALP標記的CLEIA
在以ALP為標記酶的CLEIA中，應用的底物一般為adamantyl dioxetase phosphate及其衍生物如PPD等。當ALP與底物相互作用時，ALP使底物由能量基態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài)，當非穩(wěn)態(tài)的底物以光子形式將能量轉(zhuǎn)移，并回到基態(tài)時，其發(fā)光的強度則與被測物的濃度成正比，因此測定反應產(chǎn)物的發(fā)光強度即可獲得被測物的濃度。
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